本试剂盒是应用ELISA技术研发而成的检测产品,具有快速、简便、准确和灵敏度高等优点,操作时间需45min,能减少操作误差和工作强度。
1、将所需试剂从冷藏环境中取出,置于室温(20~25℃)平衡30min以上,注意每种液体试剂使用前均须摇匀。若试剂中有晶体析出,回温溶解后方可使用。
2、取出需要数量的微孔板,将不用的微孔放入锡箔袋,保存于2~8℃。
3、洗涤液【配液1】在使用前也需回温。
4、编号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5、加标准品/样本:加标准品或样本100μL/孔到对应的微孔中,然后加入四环素类酶标物50μL/孔,再加入四环素类抗试剂50μL/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置于25℃避光环境中反应30min。
6、洗板:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,用洗涤液【配液1】250μL/孔,充分洗涤4~5次,每次间隔10s,用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)。
7、显色:加入底物液A液50μL/孔,再加底物液B液50μL/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置于25℃避光环境反应15min。
8、测定:加入终止液50μL/孔,轻轻振荡混匀,设定酶标仪于450nm处(建议用双波长450/630nm检测,请在5min内读完数据),测定每孔OD值。(若无酶标仪,则不加终止液用目测法可进行判定)。